Promocell培養基的管理與使用

　　Promocell培養基的管理與使用是細胞培養實驗成功的關鍵之一，涉及儲存、配制、無菌操作、日常維護等多個環節。以下是詳細的規范和注意事項：

　　一、Promocell培養基儲存管理

　　1.溫度控制

　　未開封時：根據說明書要求存放于2℃~8℃冰箱（冷藏），避免冷凍導致成分變性或沉淀析出。部分特殊培養基可能需要避光保存（如含血清或光敏感添加劑）。

　　已開封后：短期使用的瓶口需用75%酒精擦拭消毒，并盡快放回冰箱；長期不用的剩余培養基應標記開封日期，優先使用舊批次以減少降解風險。

　　注意：反復凍融會破壞生長因子活性，嚴禁將大包裝分裝后多次解凍！建議按實驗需求量分裝成小管冷凍保存（-20℃），使用時單向融化取用。

　　2.有效期監控

　　嚴格遵循包裝標注的有效期限，過期產品即使未用完也不可繼續使用。若發現顏色異常、渾濁或沉淀增多，提前報廢處理。

　　對于添加了抗生素（如青霉素/鏈霉素）的培養基，更需關注有效期，因抗生素效力會隨時間下降。

　　3.防污染措施

　　儲存區域專用于培養基存放，遠離揮發性化學品、強酸強堿等污染物。不同種類的培養基分開放置，避免交叉混淆。

　　定期清理冰箱，丟棄廢棄容器并消毒貨架，防止霉菌滋生污染庫存。

　　二、Promocell培養基使用前準備

　　1.預熱與平衡

　　從冰箱取出后置于室溫下回暖至約37℃（哺乳動物細胞適用），或根據目標細胞類型調整至適宜溫度。可直接水浴加熱但避免劇烈震蕩產生氣泡。

　　使用前輕輕顛倒混勻數次，確保添加物均勻分布（尤其含血清或碳酸氫鈉的培養基易分層）。

　　2.補充成分添加

　　血清/FBS：胎牛血清需滅活后按需比例加入（通常5%~20%），注意不同批號血清的性能差異可能影響實驗結果一致性。

　　雙抗溶液：若基礎培養基不含抗生素，則每100mL添加1mL青鏈霉素混合液（終濃度約100U/mL）。

　　其他因子：如谷氨酰胺、丙酮酸鈉等不穩定成分應在臨用前現配，避免長時間暴露失效。

　　3.pH校準驗證

　　用精密pH計檢測調整后的酸堿度是否符合目標范圍。可用CO培養箱內的緩沖體系自然平衡，或微量滴加NaOH/HCl調節。

　　新舊培養基對比測試：觀察指示劑顏色變化判斷是否需要進一步調校。

　　三、Promocell培養基無菌操作規范

　　1.生物安全柜內作業

　　所有涉及開放瓶口的操作必須在層流超凈工作臺中進行，包括倒取、移液、混合等步驟。操作前紫外照射30分鐘并開啟風機運行至少5分鐘驅散臭氧殘留。

　　穿戴適當的個人防護裝備（實驗服、手套、口罩），減少人為引入污染的風險。

　　2.避免微生物污染

　　嚴禁直接用手觸碰瓶口內部，傾倒時傾斜瓶身讓液體沿壁流下，避免垂直倒入產生飛濺。吸管尖*不應接觸瓶內未使用的液體部分。

　　每次取用后立即旋緊瓶蓋，并用70%酒精擦拭外表面消毒后再歸位。疑似污染的培養基應立即高壓滅菌處理。

　　3.過濾除菌必要性

　　對于自制培養基或補充新鮮成分的情況，必須經過0.22μm濾膜過濾除菌后方可使用。市售預混培養基通常已滅菌處理，但仍建議一次使用時做無菌測試（如涂布平板法確認無雜菌生長）。